Reduction of MTT to Purple Formazan by Vitamin E Isomers in the Absence of Cells

Abstract

The yellow tetrazolium salt 3-(4, 5-dimethylthiazol-2-yl)-2, 5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) is widely used to determine cell viability in cell proliferation and cytotoxic assays. MTT is reduced by metabolically active cells to form an insoluble purple formazan product that is quantifiable by spectrophotometry. It is the most common and direct assay for cell viability. However, in this present study, we demonstrated that the vitamin E isomers ?-?-?-?-tocotrienols and ?-tocopherol were able to reduce MTT into a formazan product, despite the absence of living cells. For comparison, a second method for determining cell viability, which is the neutral red uptake assay, was used in parallel with the MTT assay. The results showed that neutral red did not interact with the vitamin E isomers. Our findings suggest that the MTT assay is not suitable for studying the proliferative effects of vitamin E isomers on cell growth.

Garam tetrazolium kuning 3-(4, 5-dimetilltiazol-2-il)-2, 5-difenilltetrazolium bromida (MTT) digunakan secara meluas untuk menentukan daya maju sel dalam cerakin-cerakin percambahan sel dan sitotoksik. MTT dikurangkan oleh sel-sel yang aktif secara metabolik untuk membentuk produk formazan ungu yang tidak larut yang boleh dikira secara spektrofotometrik. Ini adalah teknik cerakin yang paling biasa dan terus bagi ujian daya maju sel. Walau bagaimanapun, dalam kajian ini, kami menunjukkan bahawa isomer-isomer vitamin E, iaitu ?-?-y-?-tokotrienol dan ?-tokoferol mampu mengurangkan MTT kepada produk formazan tanpa kehadiran sel-sel hidup. Untuk perbandingan, kaedah kedua untuk menentukan daya maju sel, iaitu teknik penyerapan neutral merah telah digunakan secara selari dengan MTT. Hasil kajian menunjukkan bahawa neutral merah tidak berinteraksi dengan isomer-isomer vitamin E. Penemuan kami mencadangkan bahawa teknik cerakin MTT adalah tidak sesuai untuk mengkaji kesan isomer-isomer vitamin E pada pertumbuhan sel-sel.